Programa

Proteostase e Desenvolvimento Terapêutico

Mestrado Bolonha em Ciências Biofarmacêuticas

Programa

Ensino Teórico:Proteínas: Estrutura e Função (Organização estrutural e forças estabilizadoras; Modificações pós-tradução; Folding in vitro - bases termodinâmicos e cinéticas; modelos de folding); Biossíntese e Processamento Proteico (Folding in vitro/in vivo; O ribosoma; Folding Co- e pós-tradução; Folding nos diferentes compartimentos celulares; O sistema de chaperones moleculares e de co-chaperones); Vias de Degradação Proteica (Tempo de semi-vida; Os N-degrons; Sistemas Ubiquitina-Proteassoma e Autofagia-Lisossomal; Degradação nos diversos compartimentos celulares); Sistemas de resposta ao stress proteotóxico (UPR e HSR); Doenças Conformacionais (Loss-of-function e gain-of-function; Doenças genéticas e mutações missense; Pequenas moléculas moduladoras do folding intracelular - chaperones farmacológicos e reguladores da proteostase); Medicamentos Órfãos (Doenças raras; Designação de medicamento órfão; Regulamentos e incentivos; Comité dos medicamentos órfão; Exemplos de medicamentos órfãos). Ensino Prático: Sistemas de expressão e purificação proteica (Sistemas procariotas e eucariotas; Péptidos e proteínas de fusão; Sistemas de co-expressão; Métodos de purificação); Ferramentas laboratoriais para caracterização estrutural e funcional de proteínas - Métodos in vitro (Técnicas não-espectroscópicas; Técnicas espectroscópicas, Avaliação da atividade biológica Ensaios de binding; Ensaios de estabilidade proteica) e Métodos in cellulo (Ensaios de pulse-chase; Co-imunoprecipitação; Ensaios de BRET); Aproximações experimentais para identificação de chaperones farmacológicos e de reguladores da proteostase (Plataformas de High-Throughput Screening; Bibliotecas de compostos; Pesquisa de compostos (random/oriented; in vitro/in cellulo); Ferramentas bioinformáticas para o estudo de proteínas (Bases de dados; Programas de comparação de informação biológica; Ferramentas bioinformáticas para previsão de alterações da estabilidade proteica (G)); Programas para visualização de moléculas. Ensino Laboratorial: Expressão e purificação de proteínas humanas, forma selvagem (WT) e variante patogénica (Transformação de células competentes; Preparação de Overnight; Lise Celular; Purificação por cromatografia de afinidade e de exclusão molecular; Rendimento; Grau de pureza); Caracterização funcional (Atividade enzimática e parâmetros cinéticos; Ensaios de inativação térmica); Caracterização estrutural (Estrutura quaternária; Proteólise limitada (estrutura terciária); Estabilidade térmica); Identificação de chaperones farmacológicos (DSF: Differential scanning Fluorimetry).